1、實驗應在超凈工作臺或者生物安全柜內進行;
2、實驗的過程中選擇尺寸的手套并能及時更換,在進出不同實驗區域或進行模板操作后都應更換實驗服、口罩、帽子及手套,以避免不同實驗區交叉污染;
3、裝有PCR試劑的反應管在打開之前應先瞬時離心,將管壁及管蓋上的液體離至管底,降低污染手套或加樣器的風險;謹慎開啟反應管,防止管內液體濺出或形成氣溶膠導致污染;需要高溫加熱的樣本,可采用封口膜進行PCR管蓋密封,避免管蓋應受熱而發生彈開;
4、吸加試劑和模板的操作應嚴格按照規范要求進行,遵守“慢吸快打”原則,盡量一次性完成,忌多次抽吸,以避免氣溶膠產生的交叉污染;
5、PCR試劑建議小量分裝,以減少反復凍融、重復取樣次數和反復使用過程中的試劑污染;多樣本PCR反應時,先配制反應混合液分裝至反應管中,加入樣本核酸,請勿同時開蓋,盡量保證單人單管,實現完全閉管操作;

6、實驗試劑應與樣品和PCR產物分開保存,不應放于同處;
7、PCR擴增實驗完成后及時將反應管取出,用一次性手套或者塑封袋將產物反應管包裹丟棄,保證管蓋緊閉;
8、實驗室自配試劑(去離子水、緩沖液等)和所有使用器具在使用之前均應高壓滅菌或紫外殺菌,尖、反應管等實驗耗材應一次性使用。







實驗結束后應該對操作臺面,儀器,實驗用具及環境進行清潔,這對污染的控制尤為重要。
1、實驗后所有的試劑按照要求進行存放,廢料和廢液及時清理,避免存放過多和過久,廢液缸用有效氯含量為2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染;
2、離心管架、試管架等可重復使用的物品浸泡到500mg/L 的消毒液中過夜,第二天用清水清洗后晾干使用;

3、對各區的生物安全柜、潔凈工作臺先用75%酒精或者500mg/L 的消毒液擦拭后采用紫外燈進行消毒處理;
4、配制含有效氯500mg/L的消毒液對設備表面、臺面、地面、物品表面、傳遞窗內及門窗進行擦拭,再用純化水對設備表面、臺面、進行擦拭,避免消毒液對實驗器具的腐蝕,儀器如核酸提取儀采用內部紫外消毒程序進行照射;
5、操作臺面使用移動紫外消毒車近距離輻照1小時,應使燈管距離工作區的距離在60-90cm;實驗室內則使用室內紫外燈整晚輻照。
測試吸頭需使用經校準的移液器
(1)準確性:將n個吸頭分別吸取定量的純水稱重,重量與體積的關系按照1 g/mL換算。
(2)氣密性:取n個吸頭,吸取量程的含有1%甘油的墨水,觀察有色液體不出現在濾塞之上,液面相同為合格。
(3)防氣溶膠性能:取n個吸頭,吸取陽性核酸,反復吹吸10次,換另一個新吸頭在陰性純水中反復吹吸10次,取陰性純水作為模板進行擴增,qPCR無擴增為合格。

(4)污染物質檢:取n個吸頭,吸取陰性純水反復吹吸10次,取陰性純水作為模板進行擴增,qPCR無擴增為合格。
(5)抑制物質檢:取n個吸頭,吸取弱陽性質控物反復吹吸10次,然后進行提取;吸取RNA核酸和DNA核酸反復吹吸10次,作為模板進行擴增,qPCR擴增未被抑制為合格。